为避免提取的核酸在柜内反复循环,造成标本之间的交叉污染,出现假阳性结果,该区域配备的生物安全柜必须是B2型的。生物安全柜工作区垂直气流全部来自实验室,排风经过过滤器(www.rfilter.com)过滤后直接排至室外,不允许回到安全柜和实验室中。
根据经验,如果实验室内配备生物安全柜,每配备一台,实验室的面积增加10m2;标本制备区的面积宜在25m2~30m2之间。本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为正压,以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。
扩增室该区域主要进行的操作为DNA或cDNA扩增。此外,已制备的DNA模板和合成的cDNA(来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。
在巢式PCR测定中,通常在轮扩增后必须打开反应管,因此巢式扩增有较高的污染危险性,第二次加样必须在本区内进行。
扩增室主要配备PCR实验室的核心仪器PCR仪,本文实例中使用了ABI7500和ABI9700两种PCR仪。
在实验室建造过程中,需要给PCR仪配备专门的UPS电源,以保证其正常工作。该区面积控制在15m2~20m2。
本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压,以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染,应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应在超净台内进行。建议采用5~10Pa压差,在控制上比较容易实现。
从PCR实验室净化中来看,有害气体输出系统的工程结构中不难看出,控制PCR实验室净化中的废气的来源非常重要。根据工艺流程和废气产生原理进行如下布控。
(1)使用通用排气罩和悬挂式排气罩作为个排气输出可控系统装置;
(2)使用原子吸收罩和悬挂式排气罩作为第二个排气输出可控系统装置;
(3)使用测试设备通风柜(也称为毒气柜)作为第三种废气输出可控系统设备;
(4)将有一个用于挥发性存储系统的挥发性存储柜,作为第四种废气输出可控装置;
(5)温控净化空气供应装置用作PCR实验室净化的空气供应系统的可控制装置。然后将5台设备连接到计算机网络,并通过有害气体输出系统的智能自动控制中心将其均匀排放。
2.洁净室(区)消毒方式的选择
PCR实验室净化中可以使用臭氧消毒,化学熏蒸,紫外线辐射,喷雾消毒剂等方法。但是无论采用哪种消毒方法,都有一定程度的耐药性,因此消毒剂品种应定期更换,且至少要同时考虑两种消毒方式。目前臭氧消毒因具有广谱、、操作方便、使用经济、无残留、不会造成二次污染等特点,被广泛用于洁净室(区)、空调系统的消毒。